Metodologija zbiranja in shranjevanja vzorcev fitopatogenih gliv in poškodovanih rastlin

Zbiranje in shranjevanje vzorcev poškodovanih rastlin in gliv

Vzorci rastlin z natančno opredeljenimi znaki bolezni in njihovih povzročiteljev se zbirajo. Zelnate rastline pobiramo v celoti, vključno s cvetovi, plodovi in ​​koreninami - z dreves in grmovnic - večinoma veje z listi. Običajno se zbirajo deli rastlin, ki imajo znake poškodb v obliki plak, pik, blazinic, oteklin, deformacij, razjed itd., Pa tudi rastline brez vidnih znakov parazita, vendar se izsušijo ali z nenadoma drobljivim listjem.

Vzorci obolelih rastlin se odvzamejo od časa kalitve do žetve. Predmeti fitopatoloških raziskav naj bodo rastline, ki rastejo na polju, vrtu, zelenjavnem vrtu, travniku in gozdu. Prav tako je treba pregledati nerazvite zemljišče - deviško deželo, pragove, močvirje in grmičevje, saj so številne divje rastline vmesni gostitelji in prenašalci bolezni gojenih rastlin. Hkrati je treba preučiti prezimljene dele rastlin - faze prezimovanja (popolne in nepopolne) številnih patogenov, ki so vir nove okužbe na začetku rastne sezone, lahko ostanejo na njih.

Pozimi je pri pregledu vrtov priporočljivo nabirati prizadete dele rastlin, pa tudi zelenjavne zaloge in sadike.

Za pridobitev sporulacije iz sklerotij, nerazvite peritecije, različne strome in drugih oblik gliv, ki ne tvorijo spore, skupaj z deli prizadetih rastlin M. K. Khokhryakov (1969) priporoča, da jih od zime do zime namestite v Klebanove kasete. Slednji so miniaturni kompakti, na leseno ogrodje iz katerih se vleče mreža kaprona ali nerjaveče žice. Preskusni vzorec (listi, stebla itd.) Se postavi v kaseto z 2 okvirji. Med polovicami dvojno zloženega enoplastnega filtrirnega papirja skupaj z etiketo, napisano na pergament s preprostim svinčnikom, privežemo kaseto in jo pustimo na površini zemlje do pomladi. Pomembno je položiti kaseto, da je goba v njej izpostavljena vsem naravnim dejavnikom: vlaženju in sušenju, zamrzovanju in odmrzovanju, insolaciji in potemnitvi itd..

Za prezimitev v naravnih pogojih gobo damo v obliki čistih kultur v epruvete, katerih bombažni čepi so zaviti s pergamentnim papirjem ali sledilnim papirjem, na zgornjem koncu zategnjeni z gumo. V drugih primerih se snopi zelnatih rastlin pustijo prezimovati in jih obesijo s letvice.

Vzorce prizadetih rastlin takoj po odvzemu odložimo v botanično mapo ali mrežo in jih ločimo s filtrom ali časopisnim papirjem. Če so vzorci zaveslali, jih previdno poravnamo, tiste, ki jih ni mogoče vstaviti v botanično mrežo (veje, gomolji, plodovi itd.), Pa zaviti v papir. Vsak vzorec mora biti opremljen z etiketo, ki označuje kraj in datum nabiranja, vrsto in sorto rastline, pa tudi ime zbiralca.

Če so vzorci namenjeni herbariju, jih damo v balirko, predhodno ločeno med seboj s plastjo oblazinjenega papirja. Papir za sproščanje je moker nadomeščen s suhim. V primerih, ko vzorcev ni mogoče posušiti (sočno sadje, korenovke itd.), Jih pritrdimo v konzerviranje tekočin. Takšne tekočine so alkohol (70.), formalin (5.), mešanica alkohola s formalinom, raztopine natrijevega klorida (8-9.) Ali bakrovega sulfata (1.). Vzorci, postavljeni v steklovino, se vlijejo s temi tekočinami..

Za daljše skladiščenje obstaja več receptov. Najpogostejša mešanica bakrovega sulfata (CuS04-5H20) - 180 g s kislim apnom (CaO) - 180 g in vode - 22,7 litrov. Bakrov sulfat se čez noč raztopi v 2 L vode. Apno dušimo v 20,7 litra vode in jo prepustimo skozi tanko sito. Če ni kislega apna, lahko vzamete 272 g nagenega apna Ca (OH) 2 in previdno vlijete raztopino bakrovega sulfata v apneno mleko. Tako dobimo najboljše suspendirane usedline. Raztopino uporabimo takoj po pripravi..

Knop rešitev sestavljen iz kalcijevega nitrata [Ca (N03) 2] - 0,5 g, kalijevega nitrata (KNO3) - 0,125 g, magnezijevega sulfata (MgS04-7H20) - 0,125 g, kalijevega fosfata (K2HPO4) - 0,125 g, železovega klorida (FeCl3 ) 5. - 1 kapljica in destilirana voda - 1 l.

Glavni konzervans za muzejske vzorce sestavljajo formaldehid (40.) - 25 ml, alkohol (95.) - 150 ml in voda - 1 l.

Da bi ohranili zeleno barvo vzorcev, jih damo v vrelo mešanico 1 dela ledene ocetne kisline, nasičene s kristalnim bakrovim acetatom, in štirimi deli vode, vremo 1-2 minuti, dokler se zelena barva ne vrne, in nato shranimo v 5. raztopino formalin.

Druga zadovoljiva metoda je, da material damo v 5. raztopino bakrovega sulfata za najmanj 6 ur in največ 24 ur. Nato se vzorci operejo z vodo in shranijo v raztopini žveplove kisline (5-6302) –2 ml z 1 litrom destilirane vode.

Geslerjev konzervans za barvno sadje jih sestavljajo cink klorid (50 g), 40% formaldehid (25 ml), glicerin (25 g) in voda (1 l). Za obarvane gobe se uporabljajo naslednje formulacije: če vzorec vsebuje pigmente, netopne v vodi - živosrebrni acetat (10 g), ledena ocetna kislina (5 ml) in voda (1 l) - v prisotnosti topnih v vodi pigmentov - živosrebrni acetat (1 g), nevtralni svinčev acetat (10 g), ledena ocetna kislina (10 ml) in 90-odstotni alkohol (1 l) ali cinkov sulfat (25 g), 40. formaldehid (10 ml) in voda (1 l ).

Da bi se izognili izhlapevanju tekočin, se kozarci s fiksnimi vzorci zaprejo z zemeljskimi zamaški, navadni zamaški so napolnjeni s parafinom. Na vsak kozarec je pritrjena nalepka..

Pripravljamo mikroskopske pripravke z laktofenolom in nikolom. Laktofenol z anilinsko modro barvo služi kot glavni konzervans za trajne pripravke, ki jih je mogoče zatesniti z lakom za nohte (bolje je nanesti več tankih plasti). Prvi sloj mora biti iz brezbarvnega laka, sicer barvilo iz laka prodre v laktofenol. Zadnja plast asfaltnega laka naj daje veliko trdnost. Segrevanje pripravka pred nanosom pokrova pospeši barvanje. Suhi praškasti material je treba najprej navlažiti z etil acetatom.

Necolove pripravke pogosto izdelujemo s preučevanjem gliv, ki rastejo na površini substrata. Nekol ali podoben pripravek iz celuloznega acetata razredčimo z acetonom do konsistence glicerola. Majhna kapljica te tekočine se postavi na kolonijo glive in posuši - to običajno traja 15-30 minut. Tanko brezbarvno folijo, ki se tvori z glivico, ki je v njej zaprta, po končnem sušenju odstranimo s skalpelom in postavimo med dve pokrovčki v čistem glicerinu.

Nekatere gobe tvorijo občutljiv konidialni aparat. Za dobre priprave se uporabljajo steklene kulture. V tem primeru je zelo pomembno upoštevati pogoje sterilnosti in delo poteka pod sterilnimi Petrijevimi posodami, katerih površina se obriše z alkoholom, vsi instrumenti, pokrovi in ​​diapozitivi pa se temeljito sterilizirajo.

Za ustvarjanje kulturnih blokov na steklenih drsnikih se kos Petrja posodi iz agarja v velikosti 7 mm2, inokulira z minimalnim številom sporov na vsaki strani, prekrije s pokrovom in položi v vlažno komoro (naprava za kamero je opisana spodaj). Ko kultura doseže zrelost, se del spor in nosilnih struktur pritrdi na drsnik in pokrije stekla. Blok agarja odstranimo in pripravimo tako, da na steklene diapozitive dodamo vzorce laktofenola s strukturo glive in jih pokrijemo s pokrovčkom, ki ga pritrdimo. Izogibajte se onesnaževanju zraka s skrbnim segrevanjem.

Način uporabe pokrovčkov predvideva rast glive v njihovem središču. Če želite to narediti, napolnite Petrijevo posodo s primernim sredstvom in pustite, da se zamrzne. Nato naredite dva diametrična zareza agarja pod pravim kotom z oprano skalpelom. Nastali trikotniki agarjev se dvignejo in pod vsakim od njih se od robov položijo zgorele pokrovčke, ki jih nato zamenjamo. Skodelica je obrnjena in razporeditev kozarcev, vidnih skozi steklo kozarca, je obdana z voščenim svinčnikom, na sredini kozarcev pa štirikotni odseki s stranicami 6-8 mm, vezani s svinčnikom. Nato skodelico spet obrnemo, nepotrebne koščke agarja izrežemo in odstranimo, medtem ko se okrogli kvadratki svetijo skozi agar. Medij je inokuliran in plošča je postavljena v inkubator. Na koncu gliva raste in se razširi po odprti površini vsakega kozarca, kot je razvidno pod daljnogledom. Z zadostnim širjenjem glive pokrovčke odstranimo z obrezom okoliškega agarja (po potrebi poškodujemo hife) in pripravimo na običajen način.

Če je treba poslati sveže vzorce, ravnajte tako: takoj po odvzemu jih postavite v takšne pogoje, da se na cesti ne pokvarijo. Stebla in potaknjenci se pošljejo v svežem, rahlo vlažnem mahu, plodovi se zavijejo v papir in prenesejo z ostružki, itd. Majhni vzorci se pošljejo v papirnate vrečke. Za dolgotrajno shranjevanje in prenos vzorcev ne morete uporabiti plastične folije, saj vreča s takšnim materialom ustvarja veliko vlage in vzorci hitro gnijejo.