Gojišča in ohranjanje kultur fitopatogenih patogenov

Za čiste gobarske kulture - fakultativni saprofiti in fakultativni zajedavci, ki ohranjajo sposobnost preživetja za namene nadaljnjega proučevanja, uporabljajo različne hranilne medije. Te medije ločimo med trdnimi in tekočimi z znano in neznano kemično sestavo, naravnimi in umetno pripravljenimi. Izbira določene vrste hranilnega substrata je odvisna od potreb glivičnega organizma in ciljev študije. Na primer, pri preučevanju imunosti rastlin, da bi ocenili odpornost rastline gostiteljice na strupene snovi patogena in učinek njegovega sproščanja na rast patogenih oblik, je treba pridobiti veliko sporulacijo.

V postopku eksperimentalnega dela so izbrani posebni mediji. Gliva se seje hkrati na različne medije v središču Petrijevih posod (v treh izvodih) in se vzdržuje pri temperaturah, optimalnih za njen razvoj. Opazovanja se izvajajo v 12–15 dneh nad rastjo in razvojem glive (rastna energija, začetek in narava spora, gostota micelija itd.), Zato se izbere najprimernejši medij. Pri uporabi standardnih sintetičnih medijev lahko njihovo sestavo spremenimo z dodajanjem in izključitvijo različnih kemičnih sestavin.

Pogosto je treba najti okolja, v katerih gliva raste in se razvija bolje kot v naravi. To lahko dosežemo z dejstvom, da se po sterilizaciji v okolju konkurenčni mikroorganizmi uničijo, njegove sestavne snovi pa se podvržejo globokim biokemijskim spremembam, ki prispevajo k boljši absorpciji nekaterih gliv. Običajno gre za agarne medije z decokcijo ali infuzijami (izvlečki) iz gostiteljske rastline ali stebel deteljice. Torej, 100 g svežih ali 50 g posušenih organov, ki hranijo rastline gob, vzamemo v 1 litru vode. Maso zdrobimo, vremo eno uro, obnovimo prvotni volumen tekočine, filtriramo, nakar dodamo 2-2,5 agar-agarja, raztopimo in steriliziramo (M. K. Khokhryakov, 1969).

Med gojenjem gliv, ki parazitirajo na lesnatih rastlinah, je I. I. Miikevič uporabljal naravne hranilne medije, pripravljene po tem receptu. Drobno sesekljane veje nekaterih drevesnih vrst (200 g) prelijemo z vodo (1 L) in vztrajamo 12 ur pri 80 ° C, nato infuzijo filtriramo in dodamo agar-agar (2,5). Nato smo medij dve uri sterilizirali s tekočo paro v Kochovem aparatu. V posebnih študijah so pripravljali ekstrakte različnih sort, ki so jih po zaporednem redčenju koncentrirali (1 glede na suho snov). Mogoče je uporabljati podobna naravna okolja v večji koncentraciji.

Številni raziskovalci so za nekatere sistematične skupine patogenih gliv izbrali naravne hranilne substrate in identificirali medije z znano kemično sestavo. Tako je bilo eksperimentalno ugotovljeno, da je vrsta iz rodu Fusarium dobro uspevajo na kuhanih riževih zrnih - gobah rodu Piricularia razvijejo obilno sporalacijo na agarnem mediju z decokcijo pšeničnih zrn ali koreninskih pridelkov korenja. Sestave trdnih hranilnih medijev za posamezne vrste in skupine gliv so prikazane v preglednici 20.

Pri pripravi medija morate upoštevati naslednje okoliščine:

1. glive običajno rastejo bolje v okolju, bogatem z ogljikovimi hidrati, vendar lahko gojenje le-teh na takšnih medijih za dolgo časa zmanjša spor.-
2. večina gliv raje rahlo kislo reakcijo (pH 6,0-6,5), medtem ko bakterije raje nevtralno (pH 7,0) ali rahlo alkalno-
3. ogljikovi hidrati in beljakovine v kislih in alkalnih raztopinah se ob segrevanju uničijo, zato jih je treba zmerno sterilizirati ali dodajati ločeno-
4. agar se 1-2 ure raztopi v polovici norme vode, hranila pa v preostali vodi, nakar se sestavine pomešajo-
5. agar se ne strdi v zelo kislem ali alkalnem okolju-
6. peptone je mogoče gobe v glavnem izključiti iz gojišča-
7. kuhano vodo je treba prednostno destilirati, saj prva vsebuje uporabne elemente v sledovih za glive iz rodu Fitoftora bolje uporabite destilirano vodo-
8. za medije, ki vsebujejo rastlinski material, je predhodno sestavljen pri nizkih (krompirjev agar) ali visokih (krompir-dekstrozni agar) temperaturah.

V nekaterih primerih (pri preučevanju strupenih izločkov patogenov, encimov itd.) Se uporabljajo tekoči hranilni mediji. Na primer, strupeni učinki izločkov Deuterophoma traheifila preučevali so ga na gojišču, vztrajanem na mletih poganjkih gostiteljske rastline (200 g poganjkov na 100 cm3 vode). Za glive iz smutijev priporočamo naslednjo sestavo: 0,03 g K2S04 - 0,01 g NH4NO3 - 10,0 g dekstroze (ali maltoze) - 0,01 g CaCl2 - 0,01 g Mga (P04) 2-4H20 in vode 100 cm3.

Za različne študije o biologiji gliv in odpornosti rastlin se pojavlja potreba po dolgoročnem skladiščenju čistih pridelkov. Po shranjevanju pa številne patogene glive spremenijo morfološke in kulturne lastnosti, včasih pa izgubijo patogene lastnosti. Zato je treba pred izvedbo poskusov z glivami, ki so jih odvzeli po dolgotrajnem skladiščenju v čisti kulturi, obnoviti njihovo patogenost z izvajanjem prehodov skozi gostiteljsko rastlino.

Sestava hranilnih medijev za gojenje fitopatogenih gliv

Široko razširjen način ohranjanja čistih gobskih kultur je njihovo občasno popuščanje na sveže hranilne medije. Večino pridelkov sadimo 2-3 krat na leto. Pri ponovni zasaditvi se prenašajo predvsem spore, v oblikah, ki ne tvorijo spore, micelije z obrobnega območja kolonije.

Presejanje se opravi v dveh ponovitvah, 3 kopije vsake gobarske kulture pa ostanejo za shranjevanje, štetje in ponovni ponovni potek. Eno od novih ponovnih posegov se uporablja samo za prihodnje resesing, drugo - za presejanje med poskusnim delom.

Za dolgotrajno skladiščenje gob je bolje uporabiti škrobne in celulozne medije brez sladkorja. Številne polsaprofitne glive so dobro ohranjene na sterilnem naravnem materialu (na primer glive iz rodu Citospora na vejah gostiteljske rastline) - v tem primeru je najprimernejša temperatura 4-5 ° C. Globoko hlajenje (približno - 20 ° C) zadovoljivo ohranja sposobnost preživetja gob zelo dolgo.

Gobarske kulture lahko konzerviramo tudi pod mineralnim oljem, po liofilizaciji (sušenje z zamrzovanjem, pod znižanim tlakom) in pod tekočim dušikom v ampulah. Če gobe zdržijo popolno predelavo, potem bodo sposobne preživeti 10 let ali več. Vendar pa je za uporabo teh metod potrebna okorna in draga oprema..

V normalnih pogojih je zbiranje gob najbolje hraniti v širokih ceveh v poševnem rastnem mediju, zaprtih z bombažnimi čepi. Vendar pazite na škodo pridelka s klopi (vrste dela) Tiroglifus in Tarsonemus), zlasti v južnih regijah in poleti v zmernem podnebju. V epruveti, bučkih in petrijevih jedeh jedo pridelke, okužijo jih z bakterijami in onesnažijo.

Obstajajo številni načini za spopadanje s temi pršicami. Najprej pa je treba upoštevati splošno higieno, sprejeti ukrepe za zagotovitev, da žuželke ne letijo v laboratorij, bodite previdni pri delu z organskim materialom in z zemljo. Ob prejemu je treba skrbno pregledati ves nov material. Če je mogoče, je treba predvideti ločene prostore za čist in umazan material..

Dovolj gosti bombažni čepi so navadno neprepustni za klope in dovod zraka v kulturo ni moten. Za večje jamstvo lahko plute zdravimo s strupi, ki škodljivo vplivajo le na klope. Priporočljiva je tudi uporaba tkivnega papirja. V ta namen po zamašitvi roba čepa gorijo v plamenu gorilnika in ga prekrijejo z lepljivo toplo želatino z bakrenim sulfatom (bakrov sulfat - 20, želatina - 20, voda - 60). Ta prevleka se nato pritrdi na koncu cevi s papirjem. Po sušenju se odvečni papir opeče. Takšen papir je zelo tanek z porami, ki preprečujejo prodiranje pršic in zagotavljajo dostop do zraka. Na enak način lahko zamašite bučke, vendar morate gumijaste čepe odstraniti in pred uporabo sterilizirati papir s papirjem..

Koristno je tudi, da ob prejemu papirja vse bučke, skodelice in epruvete zaprete z onesnaženim materialom.

Vse kulture je treba oštevilčiti in registrirati na posebnih karticah, ki beležijo število in ime kulture, kje in kje je bila dodeljena, datum dodelitve, način izolacije, ime medija, ki se uporablja za ponovno posejanje, rezultate opazovanja rasti patogena v čisti kulturi in zabeležene lastnosti.